a etapa inicial é a obtenção e purificação dos antígenos específicos para cada caso.

os antígenos são utilizados para a hiperimunização de animais como o cavalo, em protocolos estabelecidos para cada caso.

o mesmo animal pode ser utilizado para produção de soros contra vários agentes infecciosos.

após sangrias teste apontarem um título de anticorpos desejado, o animal sofre uma sangria em etapas, atingindo até 10 litros, o plasma é separado por metodologia padrão e as hemácias são devolvidas ao animal por plasmaferese.

na etapa final, os anticorpos são purificados a partir do plasma por técnicas físico-químicas e o produto submetido a testes de controle de qualidade como determinação da potência, teste de esterilidade, presença de pirogênio, entre outros.

lotes de animais (camundongos albinos) são inoculados, via IP, com várias diluições da vacina teste e de referência e acompanhados por um período de 14 a 17 dias.

após esse prazo, os animais previamente imunizados são desafiados com uma suspensão de B.pertussis, correspondente a DL50 , via IC, e acompanhados até 14 dias.

caso haja mortes de alguns animais até 72h, o teste será interrompido e novo teste realizado.

caso haja mortes de alguns animais até 72h, esses serão contabilizados e excluídos do total testado, que passará a ter a diferença como novo total para fim de cálculos posteriores.

para o cálculo da potência da vacina teste, verifica-se a DE50 desta vacina frente a DE50 da vacina de referência, através de métodos estatísticos, sendo a potência expressa em UI/ml.

vacinas contra Streptococcus pneumoniae são produzidas através da inoculação de preparações purificadas do polissacarídeo capsular.

vacinas contra Corynebacterium diphtheriae e Clostridium tetani utilizam toxoides, que são compostos proteicos preparados por inativação das suas exotoxinas responsáveis pelo quadro clínico.

vacinas contra Neisseria meningitidis podem ser produzidas com polissacarídeos isoladamente ou conjugados com proteínas carreadoras.

vacinas contra Vibrio cholerae e Yersinia pestis utilizam microrganismos mortos.

não há vacinas disponíveis atualmente contra Haemophilus influenzae.

utilização de materiais de referência ou de controle da qualidade.

manter os equipamentos calibrados e com a sua atividade funcional correta.

análise crítica dos resultados relatados.

comparações intralaboratoriais.

reensaios de itens retidos não são necessários principalmente se o laboratório já tem experiência prévia com esse tipo de análise e pode julgar os resultados.

o soro teste é obtido 4 semanas após a inoculação SC de cobaias com a vacina teste e titulado, após ser diluído, da mesma forma que um soro de referência, misturado com a L+/50 (dose letal capaz de matar 50% dos animais em até 96h) da toxina diftérica e a mistura injetada, via SC, em cobaias, para verificar a capacidade antitóxica dos soros, com leitura dos animais sobreviventes em até 96h.

a determinação da DE50 (dose efetiva 50%) pode ser então calculada através da fórmula: (DE50 antitoxina da amostra testada / DE50 antitoxina de referência) x UI por ml da antitoxina de referência.

a determinação da DE50 (dose efetiva 50%) pode ser então calculada através da fórmula: (DE50 antitoxina de referencia/ DE50 antitoxina da amostra testada) x UI por ml da antitoxina de referência.

através do ensaio de soroneutralização descrito pode-se calcular a potência do componente diftérico nas formulações vacinais.

a potência da amostra vacinal testada é liberada em UI/ml.

são utilizados como animais experimentais para a inoculação in vivo das diluições dos venenos citados 10 camundongos suíços albinos, para cada diluição, através de via IP.

outros animais podem ser empregados com igual eficácia.

após 48h, o número de animais mortos é determinado e a Dose Letal 50% (DL50) calculada por métodos estatísticos.

a Dose Efetiva 50% (DE50 ) é a concentração do soro capaz de proteger 50% dos animais contra uma quantidade fixa de veneno (DL50) de referência em 48h.

a atividade neutralizante do soro frente ao respectivo veneno é determinada com base na soroneutralização in vitro e posterior inoculação em camundongos.

os animais experimentais nesse ensaio são camundongos suíços albinos.

os animais experimentais nesse ensaio são cobaias.

para a titulação do soro antitetânico de referência ou da imunoglobulina humana, uma dose fixa de toxina tetânica de referência é misturada com várias diluições do soro de referência e da imunoglobulina humana e injetadas , por via SC, na região dorsal do membro posterior.

a proteção dos animais contra os efeitos paralisantes de uma toxina tetânica de referência é acompanhada até 96h após a inoculação e os resultados da DE50 (dose efetiva mínima 50%) anotados.

os resultados das DE50 são utilizados para o cálculo estatístico da potência antitóxica dos soros.

camundongos e cobaias são utilizados como animais de experimentação nesse teste.

uma dose humana da preparação teste é inoculada via intraperitoneal em volumes que não devem ultrapassar 1ml para camundongos e 5ml para cobaias.

os animais serão observados por um período de 24h quanto a sinais de enfermidade e outras anormalidades, incluindo morte.

os animais serão observados por um período mínimo de 7 dias quanto a sinais de enfermidade e outras anormalidades, incluindo morte.

a preparação teste cumpre a exigência de ausência de toxicidade se, após o período de observação, todos os animais sobreviverem e não apresentarem anormalidades que não sejam específicas ou esperadas para o produto.

o soro antidiftérico é produzido a partir de plasma de equinos hiperimunizados contra a toxina produzida pelo Corynebacterium diphtheriae.

a reação de soroneutralização tem a finalidade de medir o título antitóxico do soroantidiftérico.

o ensaio da potência da amostra de soro teste determina a dose neutralizante necessária para evitar a morte de um animal quando inoculado com uma dose letal de toxina diftérica, comparada a dose da antitoxina diftérica de referência.

no ensaio de soroneutralização, o soro teste é inoculado previamente no animal e, após um tempo determinado, ele é desafiado com uma dose letal de toxina diftérica.

o teste de determinação da potência é realizado em cobaias.